Kho tài liệu phong phú và chất lượng

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC DƯƠNG TRUNG THÀNH NHÂN DÒNG VÀ THIẾT KẾ VECTOR BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA ANTHOCYANIDIN REDUCTASE CỦA CÂY CHÈ (Camellia sinensis) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG THÁI NGUYÊN - 2018 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC DƯƠNG TRUNG THÀNH NHÂN DÒNG VÀ THIẾT KẾ VECTOR BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA ANTHOCYANIDIN REDUCTASE CỦA CÂY CHÈ (Camellia sinensis) Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 8420201 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Người hướng dẫn khoa học: 1. TS. Huỳnh Thị Thu Huệ 2. TS. Hoàng Thị Thu Yến THÁI NGUYÊN - 2018 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu và kết quả trình bày trong luận văn là trung thực và chưa được ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác. Mọi trích dẫn trong luận văn đều ghi rõ nguồn gốc. Tác giả Dương Trung Thành ii LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Huỳnh Thị Thu Huệ - Phòng đa dạng sinh học hệ gen, Viện Nghiên cứu hệ gen, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam; TS. Hoàng Thị Thu Yến - Khoa Công nghệ Sinh học - Trường Đại học Khoa học - người đã tận tình hướng dẫn, truyền đạt những kiến thức và kinh nghiệm quý báu để tôi hoàn thành luận văn này. Tôi xin cảm ơn các thầy cô và tập thể cán bộ Khoa Công nghệ Sinh học, cảm ơn lãnh đạo Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên và các cán bộ công tác tại Viện Nghiên cứu hệ gen - Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam đã giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề tài. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn Cử nhân Phạm Thị Hằng - Phòng đa dạng sinh học hệ gen, Viện Nghiên cứu hệ gen, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam, đã tận tình chỉ dẫn và giúp đỡ tôi hoàn thành đề tài nghiên cứu khoa học này. Nhân dịp này tôi cũng xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS. Dương Trung Dũng – Khoa Nông học – Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên đã giúp đỡ tôi trong thời gian tôi thu thập vật liệu nghiên cứu làm đề tài. Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới toàn thể gia đình, bạn bè và đồng nghiệp đã luôn cổ vũ, động viên tôi trong suốt thời gian qua. Tác giả Dương Trung Thành iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN ..................................................................................................i LỜI CẢM ƠN........................................................................................................ii MỤC LỤC............................................................................................................iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ..............................................................................v DANH MỤC CÁC BẢNG ................................................................................vii DANH MỤC CÁC HÌNH.................................................................................viii MỞ ĐẦU...............................................................................................................1 1. Lý do chọn đề tài ...............................................................................................1 2. Mục tiêu đề tài ...................................................................................................2 3. Nội dung nghiên cứu.........................................................................................2 Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU..............................................................3 1.1. SƠ LƯỢC VỀ CÂY CHÈ.............................................................................3 1.1.1. Nguồn gốc, lịch sử phát triển của cây chè ...................................... 3 1.1.2. Đặc điểm sinh học của cây chè ....................................................... 4 1.1.3. Giá trị của cây chè .......................................................................................7 1.2. TÌNH HÌNH SẢN XUẤT VÀ NGHIÊN CỨU CHÈ TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM......................................................................................... 9 1.2.1. Tình hình sản xuất chè trên thế giới và Việt Nam .......................... 9 1.2.1.1. Tình hình sản xuất chè trên thế giới............................................. 9 1.2.1.2. Tình hình sản xuất chè ở Việt Nam ........................................... 11 1.2.2. Tình hình nghiên cứu chè trên thế giới và ở Việt Nam...........................14 1.3. CATECHIN VÀ ANTHOCYANIDIN REDUCTASE Ở CHÈ .............16 1.3.1. Catechin và tác dụng của catechin ...........................................................16 1.3.2. Cơ chế sinh tổng hợp catechin ở chè........................................................19 1.3.3. Anthocyanidin reductase và gen ANR quy định tổng hợp anthocyanidin reductase...............................................................................................................20 iv Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.................23 2.1. Vật liệu nghiên cứu ......................................................................................23 2.1.1. Nguyên liệu ................................................................................... 23 2.1.2. Hóa chất .....................................................................................................23 2.1.3. Thiết bị .......................................................................................................24 2.2. Phương pháp nghiên cứu.............................................................................24 2.2.1. Phương pháp tách chiết RNA tổng số......................................................24 2.2.2. Điện di RNA tổng số.................................................................................25 2.2.3. Tổng hợp cDNA........................................................................................26 2.2.4. Nhân gen ANR bằng kĩ thuật PCR...........................................................26 2.2.5. Tinh sạch sản phẩm PCR..........................................................................28 2.2.6. Tách dòng gen ANR..................................................................................29 2.2.7. Xác định trình tự gen.................................................................................32 2.2.8. Xử lí số liệu bằng các phần mềm chuyên dụng................................................33 2.2.9. Thiết kế vector biểu hiện....................................................................................33 2.3. Sơ đồ nghiên cứu...................................................................................................34 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN.....................................................35 3.1. Khuếch đại gen ANR từ mẫu chè nghiên cứu.............................................35 3.2. Tạo dòng gen, xác định và phân tích trình tự gen mã hóa anthocyanidin reductase...............................................................................................................37 3.3. Thiết kế vector biểu hiện vi khuẩn mang gen ANR.............................................45 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ.........................................................................48 KẾT LUẬN ........................................................................................................48 KIẾN NGHỊ.......................................................................................................48 TÀI LIỆU THAM KHẢO...............................................................................49